Elongin A3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-418260

概要

TCEB3CはヒトElongin A3をコードしており、RNAポリメラーゼIIのプロセシビティ（連続的な転写伸長能）を支えるとともに、転写と共転写的な品質管理を協調させるElongin転写伸長因子複合体の構成要素です。Elonginファミリータンパク質はユビキチン依存的な制御機構と連携し、ストレス応答、プロテオスタシス、細胞周期制御に関連する細胞プログラムの形成に寄与します。転写関連因子としてのElongin A3は、増殖や分化に影響を与える遺伝子発現制御や、クロマチンに結び付いたシグナル伝達経路の研究において重要です。転写伸長やユビキチン介在性制御の破綻は、がんや神経変性疾患の生物学としばしば関連付けられるため、TCEB3Cは疾患関連モデルにおける機序解明のための有用な標的遺伝子座となります。

Elongin A3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTCEB3C遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TCEB3C内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TCEB3Cのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Elongin A3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Elongin A3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TCEB3C欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Elongin A3の機能に不可欠なTCEB3Cエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TCEB3Cゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Elongin A3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびElongin A3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TCEB3C遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Elongin A3 HDRプラスミド（h）および Elongin A3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTCEB3Cホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTCEB3C標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。