ELL CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420159

概要

Ellは、RNAポリメラーゼIIの伸長因子であるELLをコードしており、ポリメラーゼの一時停止を抑え、生産的なmRNA合成を支えることで、プロセシブな転写を促進します。ELLは、クロマチン環境やRNAプロセシングと伸長を協調させる転写制御複合体に関与し、細胞のアイデンティティや増殖に関連する遺伝子発現プログラムに影響を与えます。ELL依存的な伸長が破綻すると、転写の忠実性やストレス応答経路が変化し得るため、がんに関連する転写ネットワークにおける異常な遺伝子発現の基盤機構を調べるうえで重要です。マウスモデルでは、Ellは発生、造血制御、そしてゲノム全体の転写ダイナミクスにわたる伸長制御を研究するための扱いやすい切り口となります。

ELL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるEll遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ell内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ellのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ELLタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ELLシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ell欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ELLの機能に不可欠なEllエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ellゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ELL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびELL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ell遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ELL HDRプラスミド（m）および ELL HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEllホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEll標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。