eIF4E3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407113

概要

EIF4E3はeIF4E3をコードしており、eIF4E3は5′ mRNAキャップを認識し、キャップ依存的な翻訳開始の制御に関与する真核生物翻訳開始因子4E（eIF4E）ファミリーの一員です。典型的なeIF4E1と比べて、eIF4E3はしばしば非典型的なキャップ結合タンパク質として説明され、mRNA選択的な翻訳プログラムに影響を与えることで、プロテオスタシスやストレス適応的な遺伝子発現の形成に関わります。翻訳制御への作用を通じて、eIF4E3はmTORシグナル伝達などの増殖・栄養感知経路や、より広範なRNA代謝ネットワークとも交差します。キャップ依存的翻訳の破綻は、がん化やストレス応答状態で繰り返し見られる特徴であるため、EIF4E3は疾患関連の細胞モデルにおける翻訳リワイヤリングの機構解析に有用な標的となります。

eIF4E3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるEIF4E3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、EIF4E3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、EIF4E3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、eIF4E3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、eIF4E3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、EIF4E3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• eIF4E3の機能に不可欠なEIF4E3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、EIF4E3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• eIF4E3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびeIF4E3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、EIF4E3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  eIF4E3 HDRプラスミド（h）および eIF4E3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEIF4E3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEIF4E3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。