eIF4E2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403245-ACT

EIF4E2は、キャップ結合型の翻訳開始因子であるeIF4E2（4EHPとも呼ばれる）をコードしています。eIF4E2はeIF4Eと競合し、さらにリプレッサーと協調することでキャップ依存性翻訳を制御し、mRNA選択的なタンパク質合成を調節します。eIF4E2は、ストレス応答、分化、低酸素条件における転写後制御に関与し、酸素感知や細胞の適応に関連する経路において、mRNAの安定性や翻訳産物量に影響を与えます。また、RNA結合タンパク質やmiRNA関連複合体との相互作用を介して、細胞周期制御、代謝、生存に影響する遺伝子発現プログラムを形成します。eIF4E2を介した翻訳制御の破綻は、異常なタンパク質合成やストレスシグナルが顕著な、がん生物学に関連する状況やその他の疾患に関与することが示唆されています。

eIF4E2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EIF4E2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

eIF4E2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EIF4E2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEIF4E2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性eIF4E2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEIF4E2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるeIF4E2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEIF4E2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるeIF4E2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。