eIF4E2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403245-ACT

EIF4E2 kodiert eIF4E2 (auch als 4EHP bekannt), einen cap-bindenden Translationsinitiationsfaktor, der die mRNA-selektive Proteinsynthese moduliert, indem er mit eIF4E konkurriert und mit Repressoren zusammenwirkt, um die cap-abhängige Translation zu steuern. eIF4E2 trägt zur posttranskriptionellen Regulation während Stressantworten, Differenzierung und Hypoxie bei und beeinflusst die mRNA-Stabilität sowie die Translationseffizienz in Signalwegen, die mit der Sauerstoffsensorik und zellulären Anpassung verknüpft sind. Durch Interaktionen mit RNA-bindenden Proteinen und mikroRNA-assoziierten Komplexen prägt es Genexpressionsprogramme, die die Kontrolle des Zellzyklus, den Stoffwechsel und das Überleben beeinflussen. Eine fehlregulierte, eIF4E2-vermittelte Kontrolle der Translation wurde in Zusammenhängen beschrieben, die für die Krebsbiologie und andere Erkrankungen relevant sind, in denen abnorme Proteinsynthese und Stress-Signalgebung eine wichtige Rolle spielen.

eIF4E2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen EIF4E2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

eIF4E2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des EIF4E2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der EIF4E2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen eIF4E2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native EIF4E2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von eIF4E2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des eIF4E2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem EIF4E2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.