Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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eIF4AII Double Nickase Plasmid (h): sc-402758-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das eIF4AII Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- eIF4AII Double-Nickase-Plasmid (h) und eIF4AII Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf EIF4A2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: eIF4AII: sc-137148
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
eIF4AII Double Nickase Plasmid (h) | sc-402758-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
eIF4AII Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402758-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EIF4A2 codiert eIF4AII, eine DEAD-Box-RNA-Helikase, die innerhalb des eIF4F-Translationsinitiationskomplexes wirkt, um strukturierte 5′-UTRs zu entwinden und das Laden der Ribosomen zu fördern. Durch die Regulierung der cap-abhängigen Translation beeinflusst eIF4AII die Proteomzusammensetzung während Wachstum, Stressantworten und Zellzyklusprogression und ist mit RNA-Metabolismuswegen verknüpft, die mRNA-Stabilität und Translationseffizienz steuern. Eine veränderte Kontrolle der Translationsinitiation ist mit fehlregulierter Signalübertragung und Proteostase verbunden, was EIF4A2 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung onkogener Translationsprogramme und RNA-abhängiger Verwundbarkeiten macht. Die Aktivität von eIF4AII ist außerdem in Kontexten relevant, in denen die selektive Translation strukturierter Transkripte Differenzierung und stressadaptierte Genexpression prägt.
eIF4AII Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des EIF4A2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von EIF4A2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die EIF4A2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit EIF4A2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.