Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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eIF4AI Double Nickase Plasmid (h): sc-402623-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das eIF4AI Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- eIF4AI Double-Nickase-Plasmid (h) und eIF4AI Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf EIF4A1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
eIF4AI Double Nickase Plasmid (h) | sc-402623-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
eIF4AI Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402623-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EIF4A1 kodiert die humane DEAD-Box-RNA-Helikase eIF4AI, eine zentrale Komponente des eIF4F-Translationsinitiationskomplexes, die strukturierte 5′-UTRs entwindet und dadurch das Scannen des 43S-Präinitiationskomplexes sowie die Erkennung des Startcodons ermöglicht. Durch die Kontrolle der cap-abhängigen mRNA-Translation beeinflusst eIF4AI die Proteostase, das Fortschreiten des Zellzyklus und stressadaptive Programme und ist in Signalknoten eingebunden, die die Initiation modulieren, etwa die mTOR/4E-BP- und MAPK-Signalwege. Eine veränderte EIF4A1-Aktivität und die Abhängigkeit von eIF4A-gesteuerter Translation werden häufig im Kontext dysregulierten Wachstums und Überlebens untersucht, einschließlich onkogener Transkriptionsprogramme und Stressantworten. EIF4A1 wird zudem als mechanistischer Ansatzpunkt genutzt, um translationales Reprogrammieren, die Funktion von RNA-Helikasen und die selektive Translation komplexer mRNA-Subsets zu untersuchen.
eIF4AI Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des EIF4A1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von EIF4A1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die EIF4A1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit EIF4A1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.