EIF2D Double Nickase Plasmid (h): sc-405379-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das EIF2D Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- EIF2D Double-Nickase-Plasmid (h) und EIF2D Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf EIF2D abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: eIF2D: sc-293396
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
EIF2D Double Nickase Plasmid (h) | sc-405379-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EIF2D Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405379-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EIF2D kodiert den eukaryotischen Translationsinitiationsfaktor 2D, einen nichtkanonischen Initiationsfaktor, der an alternativer Translationsinitiation und an der Bereitstellung von tRNA an die P‑Stelle des Ribosoms unter spezifischen zellulären Bedingungen beteiligt ist. Über seine Rolle in der translationalen Regulation überschneidet sich EIF2D mit Signalwegen, die die Proteostase und adaptive Antworten auf zellulären Stress steuern, einschließlich Modulen, die mit der eIF2‑Signalgebung und der Dynamik der integrierten Stressantwort verknüpft sind. Störungen der Translationsinitiation und der stressadaptiven Proteinsynthese sind allgemein relevant für Mechanismen, die in der Neurodegeneration, der Plastizität von Krebszellen und in Modellen viraler Infektionen untersucht werden, in denen veränderte Translationsprogramme Übergänge zwischen Zellzuständen neu gestalten können. Daher wird EIF2D häufig dahingehend untersucht, wie Verschiebungen in der Nutzung von Initiationsfaktoren die mRNA‑spezifische Translation und nachgelagerte Phänotypen beeinflussen.
EIF2D Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des EIF2D-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von EIF2D abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die EIF2D-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit EIF2D-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.