Plasmide Double Nickase (h) eIF2Bα: sc-404034-NIC

EIF2B1 code la sous-unité eIF2Bα du facteur eucaryote d’initiation de la traduction 2B (eIF2B), un hétéropentamère qui agit comme facteur d’échange de nucléotides guanyliques et régénère eIF2-GTP afin de maintenir la synthèse protéique dépendante de la coiffe. eIF2B intègre les signaux issus de la réponse intégrée au stress (ISR) en modulant la sensibilité à eIF2α phosphorylée, reliant ainsi la disponibilité en nutriments, la protéostasie et la récupération cellulaire après stress du réticulum endoplasmique au contrôle traductionnel. Par ce rôle, EIF2B1 influence les taux globaux de traduction, la dynamique des granules de stress et des programmes en aval qui affectent la croissance et la survie cellulaires. Des altérations génétiques des sous-unités d’eIF2B, dont EIF2B1, sont associées à des troubles du spectre des leucodystrophies et offrent un point d’entrée mécanistique pour étudier la régulation traductionnelle adaptative au stress dans les cellules humaines.

eIF2Bα Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EIF2B1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EIF2B1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EIF2B1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EIF2B1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.