eIF2α CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420141

概要

Eif2s1 は、真核生物翻訳開始因子2（eIF2）のαサブユニットである eIF2α をコードしており、開始メチオニンtRNA（Met-tRNAi）をリボソームへ運搬する役割を介して、キャップ依存的翻訳開始およびmRNAスキャニングの中枢的な制御因子として機能します。eIF2α のSer51位のリン酸化は、PERK、PKR、GCN2、HRI などのキナーゼ下流で統合ストレス応答（ISR）を統合し、全体的なタンパク質合成を抑制する一方で、ATF4依存性転写を含む選択的翻訳プログラムを促進します。この制御ノードは、小胞体（ER）ストレス、アミノ酸欠乏、ウイルス認識、酸化ストレスを、タンパク質恒常性（プロテオスタシス）、オートファジー、アポトーシスの意思決定へと結び付けます。eIF2α シグナル伝達の破綻は、神経変性、代謝ストレス生物学、がん細胞の適応、炎症シグナル伝達といった文脈で広く研究されています。

eIF2α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるEif2s1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Eif2s1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Eif2s1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、eIF2αタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、eIF2αシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Eif2s1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• eIF2αの機能に不可欠なEif2s1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Eif2s1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• eIF2α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびeIF2α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Eif2s1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  eIF2α HDRプラスミド（m）および eIF2α HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEif2s1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEif2s1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。