eIF1B CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403809-ACT

EIF1Bは、ヒトの真核生物翻訳開始因子1B（eIF1B）をコードしており、開始コドンの選択と開始複合体の効率的な形成を支える、翻訳開始機構の保存的な構成要素です。全体的なタンパク質合成能力に影響を及ぼすことで、eIF1Bは、細胞周期の進行、ストレス応答、栄養や増殖因子シグナルへの適応など、精密な翻訳制御に依存する細胞プログラムと関わります。翻訳開始の破綻は、増殖状態やストレス適応状態で繰り返し見られる特徴であり、そのためEIF1Bは、疾患関連の文脈における遺伝子発現制御の機序研究において重要な対象となります。したがってEIF1Bの機能撹乱は、開始の忠実性や翻訳出力の変化が下流の経路や表現型をどのように再構築するかを検証するための手段として利用できます。

eIF1B CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EIF1Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

eIF1B CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EIF1B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEIF1B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性eIF1Bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEIF1B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるeIF1B依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEIF1B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるeIF1B経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。