EHD1 Double Nickase Plasmid (h): sc-407060-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das EHD1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- EHD1 Double-Nickase-Plasmid (h) und EHD1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf EHD1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
EHD1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-407060-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EHD1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-407060-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EHD1 (EH-Domäne enthaltend 1) kodiert eine ATPase aus der EHD-Proteinfamilie, die das endozytotische Recycling und die Umgestaltung von Membranen reguliert und die Rückführung von Rezeptoren und Lipiden aus Recycling-Endosomen zur Plasmamembran koordiniert. Durch Interaktionen mit Phospholipiden und endozytotischen Adaptoren unterstützt EHD1 den clathrin-assoziierten Transport, die Bildung tubulärer Endosomen sowie Rezeptor-Recycling-Programme, die die Signalstärke und die Zellmigration beeinflussen. Der EHD1-abhängige Transport wirkt sich auf Signalwege aus, die mit Nährstoffaufnahme und dem Turnover von Wachstumsfaktorrezeptoren verknüpft sind, darunter die Recycling-Dynamik des Transferrinrezeptors und von EGFR. Eine fehlregulierte EHD1-Expression oder -Funktion wurde in der Literatur mit verändertem invasivem Verhalten und einer Umverdrahtung von Signalwegen in Krebsmodellen in Verbindung gebracht, ebenso wie mit Störungen der epithelialen Polarität und des neuronalen Membrantransports, die für die Neurobiologie relevant sind.
EHD1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des EHD1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von EHD1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die EHD1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit EHD1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.