EGFR Lentiviral Activation Particles (h): sc-400015-LAC

Der epidermale Wachstumsfaktor-Rezeptor (EGFR) ist eine humane Rezeptor-Tyrosinkinase, die über ligandinduzierte Dimerisierung und Autophosphorylierung die Proliferation, das Überleben, die Migration und die Differenzierung epithelialer Zellen reguliert. Aktivierter EGFR schaltet zentrale Signalkaskaden ein, darunter RAS–RAF–MEK–ERK, PI3K–AKT–mTOR, JAK–STAT und PLCγ–PKC, und koordiniert damit Transkriptionsprogramme sowie die Kontrolle des Zellzyklus. Eine strenge Regulation von EGFR-Menge und -Aktivität wird durch Endozytose, Ubiquitinierung und Feedback-Inhibition aufrechterhalten, um Wachstumssignale mit der Gewebehomöostase in Einklang zu bringen. Eine fehlregulierte EGFR-Signalübertragung und -Expression wird umfassend im Kontext onkogener Transformation, Invasion und Mechanismen der Therapieresistenz untersucht; außerdem trägt EGFR in unterschiedlichen zellulären Kontexten zur Wundheilung und zu inflammatorischer Signalgebung bei.

EGFR Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente EGFR-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

EGFR Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der EGFR-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen EGFR-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen EGFR-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.