Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (m) EGFR: sc-420131-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)EGFR consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa EGFR (m) y el plásmido de doble nickasa EGFR (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Egfr. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: EGFR Anticuerpo (A-10): sc-373746
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) EGFR | sc-420131-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) EGFR | sc-420131-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El EGFR (Egfr) de ratón es una tirosina cinasa receptora que se une a ligandos de la familia del factor de crecimiento epidérmico para desencadenar la dimerización del receptor, la autofosforilación y la señalización aguas abajo. El EGFR activado involucra las vías MAPK/ERK, PI3K–AKT, JAK/STAT y PLCγ para regular la proliferación, la supervivencia, la diferenciación y la homeostasis del tejido epitelial. En modelos murinos, la señalización dependiente de Egfr configura programas del desarrollo y respuestas a heridas, y la actividad alterada de EGFR se utiliza con frecuencia para estudiar la desregulación de la señalización por factores de crecimiento en oncología y biología de la inflamación. EGFR también se interrelaciona con el tráfico endocítico y con reguladores de retroalimentación que ajustan la amplitud y la duración de la señal, lo que facilita investigaciones sobre el recambio del receptor y la dinámica de la transducción de señales.
EGFR El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Egfr en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Egfr. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Egfr. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Egfr alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.