Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
EFP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402678
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- EFP Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico EFP, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: EFP Antibody (E-4): sc-166926
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
EFP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-402678 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
TRIM25 codifica l’E3 ubiquitin ligasi EFP, una proteina della famiglia TRIM che catalizza eventi di ubiquitinazione che controllano la segnalazione dell’immunità innata e il metabolismo dell’RNA. EFP promuove le risposte antivirali ubiquitinando e attivando RIG-I, facilitando la segnalazione a valle dell’interferone di tipo I attraverso MAVS, TBK1 e IRF3/7, e può modulare le risposte infiammatorie associate a NF-κB. Oltre alla difesa dell’ospite, TRIM25 partecipa alla regolazione post-trascrizionale tramite interazioni con proteine leganti l’RNA e influenza programmi del ciclo cellulare e della risposta allo stress. Un’attività disregolata di TRIM25 è stata collegata ad alterazioni del tono interferonico, alla suscettibilità ai virus e a ruoli dipendenti dal contesto nella biologia tumorale e nella segnalazione endocrina, rendendolo un nodo rilevante nella ricerca su infiammazione e cancro.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO EFP (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TRIM25 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TRIM25 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TRIM25 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina EFP.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TRIM25 per lo studio della segnalazione di EFP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni TRIM25 critici per la funzione di EFP
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TRIM25 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal EFP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal EFP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TRIM25. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal EFP Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR EFP (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TRIM25 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TRIM25 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.