Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
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EF-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420117
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- EF-2 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico EF-2, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:EF-2 Anticorpo (C-9): sc-166415
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
EF-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-420117 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Eef2 codifica o fator de elongação eucariótico 2 (EF-2), uma GTPase conservada que impulsiona a translocação ribossômica durante a fase de elongação da tradução de mRNA e, assim, controla as taxas globais de síntese proteica. A atividade do EF-2 é rigidamente regulada por fosforilação mediada pela quinase eEF2, a jusante de vias de detecção de nutrientes e estresse, incluindo a sinalização de mTOR, conectando a produção translacional ao estado energético, à hipóxia e à atividade sináptica. Por meio de seu papel central na proteostase, o EF-2 influencia o crescimento celular, as respostas ao estresse e programas de diferenciação que dependem de uma rápida remodelação do proteoma. A desregulação do controle translacional envolvendo EF-2 e eEF2K tem sido implicada em disfunção neurológica e na adaptação metabólica associada a tumores, tornando Eef2 um nó útil para estudos mecanísticos da regulação translacional em sistemas murinos.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO EF-2 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Eef2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Eef2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Eef2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína EF-2.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Eef2 para a investigação da sinalização de EF-2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Eef2 críticos para a função EF-2
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Eef2 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo EF-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo EF-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Eef2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo EF-2 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR EF-2 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Eef2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Eef2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.