Plasmide Double Nickase (h) EF-1 δ: sc-405987-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) EF-1 δ correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide EF-1 δ Double Nickase (h) et le plasmide EF-1 δ Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant EEF1D. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: EF-1 δ Antibody (A-5): sc-393731
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) EF-1 δ | sc-405987-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) EF-1 δ | sc-405987-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EEF1D code le facteur d’élongation 1-delta (EF-1δ), un composant du complexe eEF1 qui soutient l’élongation de la traduction de l’ARNm en favorisant l’acheminement des ARNt aminoacylés vers le site A du ribosome et en coordonnant l’échange de nucléotides sur eEF1A. Au-delà de la synthèse protéique de base, EF-1δ contribue au contrôle traductionnel lié à la croissance cellulaire, à la protéostasie et à la signalisation en réponse au stress, reliant l’activité des ribosomes à des réseaux régulateurs plus larges. Une perturbation de l’expression ou de la fonction d’EEF1D a été associée à une altération de l’homéostasie traductionnelle et à des programmes d’adaptation cellulaire qui sont souvent remaniés dans des contextes prolifératifs et neurodégénératifs. Par conséquent, EEF1D constitue un nœud pertinent pour étudier comment la machinerie de traduction s’articule avec les voies qui gouvernent la progression du cycle cellulaire et les réponses au stress.
EF-1 δ Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EEF1D dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EEF1D. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EEF1D. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EEF1D.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.