Plásmido Doble Nickase (h) EEA1: sc-400234-NIC

EEA1 codifica el antígeno 1 de endosoma temprano, un efector de Rab5 que actúa como factor de anclaje necesario para el acoplamiento de endosomas tempranos y la fusión homotípica. A través de su dominio FYVE, EEA1 se une al fosfatidilinositol 3-fosfato y coordina la identidad de la membrana endosomal con los eventos de tráfico vesicular, influyendo en la endocitosis mediada por receptores y en la clasificación de la carga. La dinámica endosomal dependiente de EEA1 se entrecruza con la señalización de PI3K, la organización del citoesqueleto y la maduración de los compartimentos endocíticos que regulan el recambio de receptores de factores de crecimiento. La desregulación del tráfico endosomal y las alteraciones del eje Rab5–EEA1 se han vinculado con cambios en la homeostasis de la señalización en cáncer y con defectos endolisosomales implicados en contextos de investigación sobre enfermedades neurodegenerativas e infecciosas.

EEA1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EEA1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EEA1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EEA1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EEA1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.