EDG-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420644

概要

Lpar1は、リゾホスファチジン酸（LPA）に対するGタンパク質共役受容体であるEDG-2をコードしており、細胞外の脂質シグナルを、細胞移動・増殖・生存・細胞骨格リモデリングを制御する細胞内プログラムへと変換する。EDG-2は主としてGαi/o、Gαq/11、Gα12/13経路に結合し、PI3K–AKTやPLC–Ca2+シグナル、ならびにRhoA/ROCKを介したアクチンダイナミクスを活性化することで、接着や収縮性に影響を与える。マウス組織では、Lpar1シグナルは、走化性やバリア機能の制御を通じて、神経発生過程、血管および線維芽細胞の応答、免疫細胞のトラフィッキングに寄与する。LPA–EDG-2活性の破綻は、炎症性・線維化性リモデリング、ならびに腫瘍細胞の運動性や微小環境とのクロストークに関わる機構に関与することが示唆されており、経路中心の疾患モデルにおける有用性を支持している。

EDG-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるLpar1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Lpar1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Lpar1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、EDG-2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、EDG-2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Lpar1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• EDG-2の機能に不可欠なLpar1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Lpar1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• EDG-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびEDG-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Lpar1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  EDG-2 HDRプラスミド（m）および EDG-2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはLpar1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のLpar1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。