Plásmido CRISPR de Activación (h) EDAR: sc-405342-ACT

EDAR codifica el receptor de ectodisplasina A, un miembro de la superfamilia de receptores del TNF que media la señalización epitelio‑mesenquimatosa durante el desarrollo de los folículos pilosos, los dientes y las glándulas sudoríparas ecrinas. La activación de EDAR dependiente de ligando recluta proteínas adaptadoras como EDARADD para propagar la señalización de NF‑κB y los programas transcripcionales posteriores que controlan la formación de placodas, la diferenciación de queratinocitos y la morfogénesis de los anexos cutáneos. La actividad desregulada de la vía de EDAR se asocia con fenotipos de displasia ectodérmica y anomalías del desarrollo que afectan a los anexos de la piel. En modelos celulares humanos, EDAR sirve como un nodo mecanístico para estudiar la regulación transcripcional vinculada a NF‑κB en epitelios estratificados y sistemas de organoides.

EDAR El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de EDAR sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

EDAR El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus EDAR en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional EDAR, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de EDAR. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo EDAR y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de EDAR en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía EDAR en células tumorales con expresión de EDAR silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.