Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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ECM1 Double Nickase Plasmid (h): sc-404321-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ECM1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ECM1 Double-Nickase-Plasmid (h) und ECM1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ECM1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ECM1: sc-365946
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ECM1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404321-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ECM1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404321-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ECM1 (Extrazellulärmatrixprotein 1) ist ein sezerniertes Glykoprotein, das in der basalmembranassoziierten extrazellulären Matrix angereichert ist und über Interaktionen mit strukturellen und signalgebenden ECM-Komponenten an der Organisation der Gewebearchitektur beteiligt ist. Es trägt zur Regulation der Zell‑Matrix‑Adhäsion, zum Umbau der extrazellulären Matrix sowie zu Mikroumgebungs‑Signalen bei, die die epitheliale Homöostase und angiogene Prozesse beeinflussen. Eine veränderte ECM1-Expression wurde mit fehlregulierter stromaler Signalübertragung und pathologischen Veränderungen in Haut, Schleimhäuten und anderen Geweben in Verbindung gebracht, was ECM1 zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien extrazellulärer Signalnetzwerke macht. Als matrixassoziierter Faktor wird ECM1 häufig im Kontext fibroseähnlicher Umbauprozesse, entzündungsbedingter Gewebeveränderungen und der Biologie des Tumormikromilieus untersucht.
ECM1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ECM1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ECM1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ECM1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ECM1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.