ECM1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-420098-ACT

マウスEcm1は、細胞外マトリックス（extracellular matrix：ECM）タンパク質1（ECM1）をコードしています。ECM1は分泌性のマトリセルラー糖タンパク質であり、細胞外マトリックスの組織化や細胞—マトリックス間シグナル伝達を調節します。ECM1は、マトリックス構成要素やプロテアーゼネットワークとの相互作用を介して、表皮分化、血管新生に伴うリモデリング、基底膜構造の制御などの過程に関与します。ECM1発現の変化は、組織構築の破綻、線維化様のリモデリング、腫瘍微小環境の挙動変化と関連づけられており、炎症、創傷修復、間質—上皮クロストークの研究において重要です。マウスモデルでは、Ecm1は皮膚生物学、血管恒常性、ならびに細胞外マトリックス依存的シグナル伝達経路における役割を調べる目的で、しばしば解析されています。

ECM1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Ecm1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ECM1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Ecm1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEcm1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ECM1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEcm1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるECM1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEcm1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるECM1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。