ECM1 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-420098-ACT

Das murine Gen **Ecm1** kodiert das extrazelluläre Matrixprotein 1 (ECM1), ein sezerniertes, matrizenassoziiertes Glykoprotein, das die Organisation der extrazellulären Matrix sowie die Zell–Matrix-Signalübertragung moduliert. ECM1 ist an Prozessen wie der epidermalen Differenzierung, dem angiogenen Remodeling und der Regulation der Basalmembranstruktur beteiligt, und zwar über Interaktionen mit Matrixkomponenten und Proteasenetzwerken. Eine veränderte ECM1-Expression wurde mit einer gestörten Gewebearchitektur, fibroseähnlichem Remodeling und Veränderungen im Verhalten des Tumormikromilieus in Verbindung gebracht, was ECM1 für Studien zu Entzündung, Wundheilung und Stromal–Epithel-Kommunikation relevant macht. In Mausmodellen wird **Ecm1** häufig im Hinblick auf seine Funktionen in der Hautbiologie, der vaskulären Homöostase und extrazellulärmatrixabhängigen Signalwegen untersucht.

ECM1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Ecm1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ECM1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Ecm1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Ecm1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ECM1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Ecm1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ECM1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ECM1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Ecm1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.