ECHS1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406053

概要

ECHS1 は短鎖エノイル CoA ヒドラターゼ 1 をコードしており、脂肪酸β酸化スパイラルにおいて短鎖 trans-2-エノイルCoA 中間体の水和反応を触媒する、ミトコンドリア・マトリックス酵素である。エネルギー代謝における役割を通じて、ECHS1 はミトコンドリアでのアセチルCoA 産生を支えるとともに、栄養ストレス下でのレドックス恒常性および酸化的リン酸化を維持する経路とも交差する。ECHS1 機能の障害はミトコンドリア基質利用を乱し、乳酸アシドーシスや神経変性表現型を特徴とする先天代謝異常と関連する。細胞モデルでは、ECHS1 はミトコンドリアの生体エネルギー、代謝物フラックス、ストレス応答性シグナル伝達への影響の観点から研究されることが多い。

ECHS1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるECHS1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ECHS1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ECHS1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ECHS1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ECHS1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ECHS1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ECHS1の機能に不可欠なECHS1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ECHS1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ECHS1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびECHS1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ECHS1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ECHS1 HDRプラスミド（h）および ECHS1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはECHS1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のECHS1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。