Plasmide Double Nickase (h) ECE-1: sc-402379-NIC

ECE1 code l’enzyme de conversion de l’endothéline 1 (ECE-1), une métalloprotéase membranaire au zinc qui clive les grandes endothélines pour générer des peptides d’endothéline bioactifs, modulant ainsi la signalisation des récepteurs de l’endothéline. En régulant la vasoconstriction médiée par l’endothéline, la fonction endothéliale et le tonus du muscle lisse, ECE-1 contribue à des voies qui contrôlent l’homéostasie vasculaire et les réponses inflammatoires. ECE-1 intervient également dans le traitement des peptides extracellulaires au sein des systèmes sécrétoire et endosomal, influençant la disponibilité locale des peptides et la dynamique d’activation des récepteurs. Une activité ou une expression altérée d’ECE1 a été associée, dans de multiples systèmes modèles, à des phénotypes de remodelage cardiovasculaire et vasculaire pulmonaire, à des dysrégulations rénales et métaboliques, ainsi qu’à la signalisation du microenvironnement tumoral.

ECE-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ECE1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ECE1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ECE1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ECE1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.