EBF3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402181-NIC

EBF3は、保存されたヘリックス・ループ・ヘリックス（HLH）モチーフを介してDNAに結合し、神経分化、細胞周期の進行、系譜決定を制御する遺伝子プログラムを調節する、初期B細胞因子（early B-cell factor）ファミリーの転写因子をコードしています。ヒト細胞では、EBF3はクロマチンのアクセシビリティを形作る転写ネットワークに組み込まれ、神経系および間葉系の文脈にわたって発生タイミングの協調に関与します。EBF3の機能異常は、知的障害や運動失調を伴う症候群性の病態を含む神経発達障害と関連づけられており、これは神経細胞の成熟と回路形成における同因子の役割と整合します。EBF3は広範な転写カスケードに影響するため、発生における遺伝子制御、細胞アイデンティティ、ストレス応答性の転写を扱うモデルで頻繁に研究されています。

EBF3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における EBF3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、EBF3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、EBF3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、EBF3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。