Plásmido CRISPR de Activación (h) EBF2: sc-402456-ACT

EBF2 (factor temprano de células B 2) es un factor de transcripción de tipo hélice‑bucle‑hélice que se une a motivos específicos de ADN para regular la especificación de linaje y los programas de diferenciación durante el desarrollo humano. Desempeña funciones destacadas en la biología de los adipocitos, la diferenciación neuronal y las vías osteogénicas al coordinar redes transcripcionales que controlan la expresión de genes metabólicos y las decisiones de destino celular. La actividad de EBF2 se integra con la remodelación de la cromatina y la selección de potenciadores (enhancers) para mantener estados transcripcionales estables, y su desregulación se ha asociado con alteraciones de los programas termogénicos del tejido adiposo, fenotipos del neurodesarrollo y reprogramación transcripcional relacionada con el cáncer. Como regulador nodal de la expresión génica específica de tejido, EBF2 se estudia con frecuencia en el contexto del control epigenético, la homeostasis metabólica y las cascadas de señalización ligadas a la diferenciación.

EBF2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de EBF2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

EBF2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus EBF2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional EBF2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de EBF2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo EBF2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de EBF2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía EBF2 en células tumorales con expresión de EBF2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.