Plasmide Double Nickase (m) E-cadherin: sc-419587-NIC

Le gène murin Cdh1 code l’E‑cadhérine, une glycoprotéine d’adhérence cellule‑cellule dépendante du Ca2+ qui forme des jonctions d’adhérence via des interactions homophiles et sa connexion au cytosquelette d’actine par l’intermédiaire des caténines. L’E‑cadhérine contribue à établir la polarité épithéliale, l’intégrité de la barrière et la morphogenèse tissulaire, en s’intégrant à des réseaux de signalisation tels que les voies Wnt/β‑caténine, Hippo et des GTPases Rho, qui coordonnent la tension aux jonctions et les programmes transcriptionnels. La perturbation de l’adhérence médiée par l’E‑cadhérine est étroitement associée à la transition épithélio‑mésenchymateuse, à des modifications de la migration cellulaire et à une perte de différenciation. Dans des modèles murins, la perturbation de Cdh1 est largement utilisée pour étudier les défauts du développement, l’homéostasie épithéliale et les mécanismes à l’origine de phénotypes invasifs dans des contextes pertinents pour la maladie.

E-cadherin Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Cdh1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Cdh1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Cdh1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Cdh1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.