Plasmide CRISPR d'Activation (h) E-cadherin: sc-400031-ACT

CDH1 code l’E‑cadherine, un récepteur d’adhésion cellule–cellule dépendant du calcium qui forme des jonctions d’adhérence par liaison homophilique et par couplage au cytosquelette d’actine via les caténines. En stabilisant l’architecture épithéliale et la polarité apico‑basale, l’E‑cadherine influence l’inhibition de contact, la fonction barrière et la morphogenèse tissulaire, et elle s’interface avec des voies telles que la signalisation Wnt/β‑caténine, qui coordonnent les programmes transcriptionnels avec l’intégrité des jonctions. La perte, la redistribution ou le silençage transcriptionnel de l’E‑cadherine sont fréquemment associés à la transition épithélio‑mésenchymateuse (TEM), à des phénotypes de migration et d’invasion altérés, ainsi qu’à des états de différenciation perturbés. La dérégulation de CDH1 est également pertinente pour l’étude des gènes suppresseurs de tumeurs et de la prédisposition héréditaire au cancer, notamment le cancer gastrique diffus et le cancer du sein lobulaire, ainsi que dans des modèles de métastase et de développement d’organoïdes.

E-cadherin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CDH1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

E-cadherin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CDH1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CDH1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de E-cadherin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CDH1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de E-cadherin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie E-cadherin dans les cellules tumorales présentant une expression de CDH1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.