dystrophin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (porcine): sc-437292

概要

ジストロフィンは大型の細胞骨格タンパク質で、細胞内のアクチンネットワークを筋細胞膜（サルコレマ）上のジストロフィン関連糖タンパク質複合体に連結し、収縮時に筋線維を安定化させます。骨格筋および心筋において膜の完全性とメカノトランスダクションを支え、カルシウム恒常性、一酸化窒素（NO）シグナル伝達、細胞ストレス応答を調整するシグナル過程にも影響します。ジストロフィンの破綻はサルコレマの耐性を損ない、筋線維損傷、炎症、進行性のリモデリングを引き起こします。これは筋ジストロフィーの機序を研究するうえで、分子レベルの主要な切り口として広く用いられています。ブタ系の研究では、ジストロフィンの生物学的特性を活用し、大型動物という文脈で筋発生、筋の構築、疾患関連経路をモデル化します。

dystrophin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（porcine）は、porcine細胞株における遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、dystrophinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、dystrophinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• dystrophinの機能に不可欠なエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• dystrophin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（porcine）およびdystrophin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（porcine2）によってコードされるgRNAは、遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  dystrophin HDRプラスミド（porcine）および dystrophin HDRプラスミド（porcine2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定の標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。