Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (m) Dynactin p62: sc-426674-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)Dynactin p62 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Dynactin p62 (m) y el plásmido de doble nickasa Dynactin p62 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Dctn4. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Dynactin p62 Anticuerpo (H-4): sc-55603
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) Dynactin p62 | sc-426674-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) Dynactin p62 | sc-426674-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen murino Dctn4 codifica la dinactina p62, una subunidad del complejo dinactina que facilita el transporte citoplasmático impulsado por la dineína a lo largo de los microtúbulos. La dinactina p62 contribuye a la unión de la carga y a la motilidad procesiva de los ensamblajes dineína–dinactina, influyendo en el posicionamiento de endosomas y lisosomas, el tráfico vesicular y el manejo de cargas asociado a la autofagia. A través de estas funciones, Dctn4 afecta la homeostasis de neuronas y células inmunitarias, donde el transporte a larga distancia y la distribución de orgánulos son esenciales. La alteración de componentes de la vía dineína–dinactina se asocia de forma amplia con fenotipos neurodegenerativos, cambios en la proteostasis y señalización inflamatoria, lo que convierte a Dctn4 en un punto de interés para estudios mecanísticos sobre defectos de transporte basados en microtúbulos.
Dynactin p62 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Dctn4 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Dctn4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Dctn4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Dctn4 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.