Plasmide Double Nickase (h) DUSP8: sc-404385-NIC

La phosphatase à double spécificité 8 (DUSP8), également connue sous le nom de M3/6, est une phosphatase des MAPK qui déphosphoryle des résidus de thréonine et de tyrosine sur des MAPK activées, avec une activité marquée envers les voies de signalisation JNK et p38. En limitant les cascades de kinases activées par le stress, DUSP8 contribue à réguler la prolifération cellulaire, l’apoptose, la différenciation et les programmes transcriptionnels inflammatoires. DUSP8 est induite en réponse au stress cellulaire et aux signaux des facteurs de croissance, participant à un contrôle en rétroaction négative de la dynamique des voies MAPK. Une expression ou une signalisation de DUSP8 dérégulée a été associée à une altération de la sortie de la voie MAPK/JNK en cancérologie, dans des contextes métaboliques et inflammatoires, ainsi que dans des phénotypes neurologiques, ce qui en fait un nœud utile pour l’étude des mécanismes de ces voies.

DUSP8 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DUSP8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DUSP8. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DUSP8. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DUSP8.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.