Plasmide CRISPR d'Activation (h) DUSP27: sc-404063-ACT

DUPD1 code le membre de la famille des phosphatases à double spécificité DUSP27, une protéine impliquée dans la régulation de la signalisation dépendante de la phosphorylation en modulant des résidus sérine/thréonine et tyrosine sur des protéines cibles. L’activité associée à DUSP27 est liée au contrôle de voies pilotées par des kinases, qui coordonnent la différenciation cellulaire, l’organisation du cytosquelette et des programmes de signalisation sensibles au stress. Dans les tissus humains, l’expression de DUSP27 a été étudiée dans le contexte du développement et du remodelage musculaires, où une modification de l’équilibre phosphatases/kinases peut influencer la fonction contractile et les transitions d’état cellulaire. Une dérégulation de la signalisation de la famille DUSP est largement pertinente pour des maladies caractérisées par une activité anormale des voies liées aux MAPK et une homéostasie de la phosphorylation altérée, ce qui étaye l’utilisation de modèles de perturbation de DUSP27 pour des études mécanistiques.

DUSP27 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DUPD1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DUSP27 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DUPD1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DUPD1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DUSP27. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DUPD1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DUSP27 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DUSP27 dans les cellules tumorales présentant une expression de DUPD1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.