DUSP18 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405897

概要

Dual specificity phosphatase 18（DUSP18）は、非典型的DUSPファミリーに属するメンバーで、リン酸化セリン／スレオニン残基およびリン酸化チロシン残基を脱リン酸化することで、キナーゼ駆動性のシグナル伝達を調節します。MAPK経路のシグナル強度（トーン）の制御や、増殖・生存・ミトコンドリア機能に影響するより広範な細胞ストレス応答過程との関連が示されています。リン酸化依存的なシグナル伝達ネットワークを形成することで、DUSP18は状況依存的に転写プログラムや代謝恒常性にも影響を及ぼし得ます。この種の制御因子におけるホスファターゼ活性の変化は、がんや炎症性／代謝性表現型など、シグナル制御の破綻を特徴とする疾患と関係するため、DUSP18は経路解析に有用なノードとなります。

DUSP18 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDUSP18遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DUSP18内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DUSP18のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DUSP18タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DUSP18シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DUSP18欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DUSP18の機能に不可欠なDUSP18エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DUSP18ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DUSP18 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDUSP18 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DUSP18遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DUSP18 HDRプラスミド（h）および DUSP18 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDUSP18ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDUSP18標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。