DUOX2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403534

概要

DUOX2（dual oxidase 2）は、上皮細胞の頂端側表面で過酸化水素を産生する膜結合型NADPHオキシダーゼをコードしており、ペルオキシダーゼ媒介反応やレドックス依存性シグナル伝達の基質を供給します。粘膜の自然免疫防御の一環として、DUOX2活性はカルシウムシグナル、サイトカインによって駆動されるJAK/STAT応答、そしてバリア機能や抗菌プログラムを形作る酸化ストレス経路と統合されています。DUOX2の発現や活性の調節異常は、炎症性腸疾患の罹患感受性、慢性の粘膜炎症、宿主—マイクロバイオーム相互作用の変化と関連づけられており、甲状腺ホルモン合成や上皮性発がんの文脈でも研究されています。DUOX2由来のROSはMAPKおよびNF-κBシグナルを調節し得るため、上皮モデルにおける増殖、分化、DNA損傷応答への影響を調べる目的でしばしば解析対象となります。

DUOX2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDUOX2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DUOX2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DUOX2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DUOX2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DUOX2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DUOX2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DUOX2の機能に不可欠なDUOX2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DUOX2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DUOX2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDUOX2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DUOX2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DUOX2 HDRプラスミド（h）および DUOX2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDUOX2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDUOX2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。