Plasmide CRISPR/Cas9 KO DUOX2 (h): sc-403534

Présentation

DUOX2 (dual oxidase 2) code une NADPH oxydase associée à la membrane qui génère du peroxyde d’hydrogène à la surface apicale des cellules épithéliales, fournissant un substrat aux réactions médiées par les peroxydases ainsi qu’à la signalisation dépendante du redox. Dans le cadre de la défense innée des muqueuses, l’activité de DUOX2 est intégrée à la signalisation calcique, aux réponses JAK/STAT induites par les cytokines et aux voies du stress oxydant qui façonnent la fonction de barrière et les programmes antimicrobiens. Une expression ou une activité dérégulée de DUOX2 a été associée à une susceptibilité aux maladies inflammatoires de l’intestin, à une inflammation chronique des muqueuses et à des interactions hôte–microbiote altérées ; elle est également étudiée dans le contexte de l’hormonogenèse thyroïdienne et de la carcinogenèse épithéliale. Comme les ERO dérivées de DUOX2 peuvent moduler la signalisation MAPK et NF‑κB, DUOX2 est fréquemment étudiée pour ses effets sur la prolifération, la différenciation et les réponses aux dommages de l’ADN dans des modèles épithéliaux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DUOX2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DUOX2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DUOX2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DUOX2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DUOX2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DUOX2 pour l'étude de la signalisation de DUOX2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DUOX2 essentiels à la fonction de DUOX2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DUOX2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DUOX2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le DUOX2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DUOX2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DUOX2 plasmide HDR (h) et le DUOX2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DUOX2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DUOX2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.