DUOX1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-430265

Panoramica

Duox1 codifica la dual ossidasi 1 (DUOX1), un enzima della famiglia delle ossidasi NADPH che genera perossido di idrogeno sulla superficie cellulare e lungo le vie secretorie. Negli epiteli e nei tessuti mucosali del topo, le specie reattive dell’ossigeno derivate da DUOX1 contribuiscono alla segnalazione redox, alla difesa innata dell’ospite e alla regolazione di processi quali la riparazione delle ferite e le risposte infiammatorie. L’attività di DUOX1 si integra con la segnalazione calcio-dipendente e influenza vie a valle sensibili agli stimoli ossidativi, inclusi i programmi trascrizionali associati a MAPK e NF-κB. Una produzione deregolata di ROS mediata da DUOX1 è stata implicata in modelli di infiammazione delle vie aeree, disfunzione della barriera epiteliale e biologia dello stress ossidativo rilevante per i meccanismi di malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DUOX1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Duox1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Duox1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Duox1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DUOX1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Duox1 per lo studio della segnalazione di DUOX1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Duox1 critici per la funzione di DUOX1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Duox1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DUOX1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal DUOX1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Duox1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DUOX1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR DUOX1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Duox1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Duox1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.