DUOX1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402745-ACT

DUOX1 (dual oxidase 1) codifica una NADPH ossidasi associata alla membrana che genera perossido di idrogeno sulle superfici epiteliali, sostenendo la difesa dell’ospite e la segnalazione dipendente dallo stato redox. Attraverso una produzione regolata di specie reattive dell’ossigeno, DUOX1 influenza le risposte immunitarie innate, la biologia della barriera mucosale e il controllo redox di vie di segnalazione come MAPK e NF-κB, che modellano l’espressione genica infiammatoria e la riparazione delle ferite. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di DUOX1 sono state collegate a una disregolazione dello stress ossidativo e al rimodellamento dell’epitelio in contesti di malattie delle vie aeree e gastrointestinali. Nei modelli cellulari umani, DUOX1 rappresenta un nodo sperimentalmente gestibile per analizzare come l’H₂O₂ localizzato moduli le reti di segnalazione, i programmi citochinici e le risposte al danno ossidativo.

DUOX1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di DUOX1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

DUOX1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus DUOX1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione DUOX1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di DUOX1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus DUOX1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da DUOX1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via DUOX1 nelle cellule tumorali con espressione di DUOX1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.