Plasmide CRISPR d'Activation (h) DUOX1: sc-402745-ACT

DUOX1 (dual oxydase 1) code une oxydase NADPH associée à la membrane qui génère du peroxyde d’hydrogène à la surface des épithéliums, contribuant à la défense de l’hôte et à la signalisation dépendante du redox. Par une production régulée d’espèces réactives de l’oxygène, DUOX1 influence les réponses immunitaires innées, la biologie de la barrière muqueuse et le contrôle redox de voies telles que MAPK et NF‑κB, qui façonnent l’expression des gènes inflammatoires et la réparation des tissus. Des altérations de l’expression ou de l’activité de DUOX1 ont été associées à une dérégulation du stress oxydatif et au remodelage épithélial dans des contextes de maladies des voies respiratoires et du tractus gastro‑intestinal. Dans des modèles cellulaires humains, DUOX1 constitue un nœud expérimental exploitable pour analyser comment le H₂O₂ localisé module les réseaux de signalisation, les programmes de cytokines et les réponses aux dommages oxydatifs.

DUOX1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DUOX1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DUOX1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DUOX1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DUOX1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DUOX1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DUOX1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DUOX1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DUOX1 dans les cellules tumorales présentant une expression de DUOX1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.