Plásmido CRISPR de Activación (h) Duffy: sc-406288-ACT

ACKR1 codifica el antígeno Duffy/receptor de quimiocinas, un receptor atípico de quimiocinas expresado de forma prominente en eritrocitos y en células endoteliales de vénulas, que se une a quimiocinas inflamatorias, incluidas CCL2, CXCL8 y ligandos relacionados. Al actuar como sumidero y transportador de quimiocinas, Duffy modula los gradientes de quimiocinas, el tráfico de leucocitos y el tono inflamatorio dentro del microambiente vascular. La variación en la expresión de ACKR1 se utiliza ampliamente como modelo para estudiar la homeostasis de quimiocinas, la biología endotelial y la regulación de antígenos de superficie eritrocitarios, con relevancia para fenotipos asociados a la inflamación y rasgos hematológicos. Estas funciones conectan a ACKR1 con redes más amplias de señalización inmunitaria que gobiernan la migración celular, la señalización de citocinas/quimiocinas y la inflamación vascular.

Duffy El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ACKR1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Duffy El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ACKR1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ACKR1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Duffy. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ACKR1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Duffy en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Duffy en células tumorales con expresión de ACKR1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.