Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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dsg1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401442-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- dsg1 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- dsg1ダブルニカースプラスミド（h）およびdsg1ダブルニカースプラスミド（h2）は、DSG1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: dsg1 抗体 (B-11): sc-137164
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
dsg1 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-401442-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
dsg1 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-401442-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
デスモグレイン1（DSG1；dsg1）はカルシウム依存性のデスモソーム型カドヘリンで、重層上皮において強固な細胞間接着を担い、デスモソーム形成の組織化と表皮バリアの完全性維持に寄与します。DSG1はプラコグロビン、プラコフィリン類、デスモプラキンと結合することで、細胞間接着装置をケラチン中間径フィラメント網へ連結し、機械的ストレス下での組織の耐性を支えます。DSG1の機能は上皮分化プログラムや接着構造のリモデリング過程とも交差し、EGFR/MAPKなどの経路を介したシグナル伝達や炎症性刺激への応答に影響します。DSG1の発現や機能の異常は皮膚バリア障害や、デスモソーム関連の水疱形成・角皮症様の表現型と関連しており、接着機構と表皮恒常性の分子機構研究における重要な標的となっています。
dsg1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における DSG1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、DSG1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、DSG1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、DSG1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。