Plasmide Double Nickase (h) dsg1: sc-401442-NIC

La desmogléine-1 (DSG1 ; dsg1) est une cadhérine desmosomale dépendante du calcium qui assure une forte adhésion cellule–cellule dans les épithéliums stratifiés, en contribuant à organiser l’assemblage des desmosomes et à maintenir l’intégrité de la barrière épidermique. En s’associant à la plakoglobine, aux plakophilines et à la desmoplakine, DSG1 relie les jonctions intercellulaires au réseau de filaments intermédiaires de kératine et soutient la résistance des tissus sous contrainte mécanique. La fonction de DSG1 s’inscrit à l’interface des programmes de différenciation épithéliale et des processus de remodelage des jonctions, qui influencent la signalisation via des voies telles que EGFR/MAPK et les réponses aux signaux inflammatoires. Une expression ou une fonction altérée de DSG1 est associée à des défauts de la barrière cutanée ainsi qu’à des phénotypes de dermatoses bulleuses liées aux desmosomes et de kératodermie, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de l’adhésion et de l’homéostasie épidermique.

dsg1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DSG1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DSG1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DSG1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DSG1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.