Plasmide CRISPR d'Activation (h) DSC1: sc-402944-ACT

Le gène humain **DSC1** code la desmocollin-1, une protéine d’adhérence de la famille des cadhérines dépendantes du calcium, localisée aux desmosomes dans les épithéliums stratifiés. DSC1 favorise des jonctions intercellulaires solides en participant aux interactions entre cadhérines desmosomales et en se couplant à la plakoglobine, aux plakophilines et à la desmoplakine afin d’ancrer les filaments intermédiaires, contribuant ainsi à l’intégrité de la barrière épidermique et aux propriétés mécaniques des tissus. Son expression est étroitement liée aux programmes de différenciation des kératinocytes et à la morphogenèse épithéliale, et les altérations de sa régulation sont étudiées dans le contexte d’une adhérence cellule–cellule compromise, de la dysplasie épithéliale et de la biologie tumorale. Comme le remodelage des desmosomes s’inscrit à l’interface entre la dynamique du cytosquelette et la signalisation liée au stress, DSC1 est fréquemment étudié dans les voies qui régissent la cohésion, la différenciation et la migration épithéliales.

DSC1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DSC1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DSC1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DSC1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DSC1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DSC1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DSC1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DSC1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DSC1 dans les cellules tumorales présentant une expression de DSC1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.