Plásmido CRISPR de Activación (h) DP-1: sc-403331-ACT

El gen humano **TFDP1** codifica **DP-1**, un factor de transcripción específico de secuencia que forma heterodímeros con miembros de la familia **E2F** para regular genes necesarios para la transición **G1/S**, la replicación del ADN y la progresión mitótica. Los complejos **DP-1/E2F** integran señales de la vía de **RB** para coordinar la entrada al ciclo celular, el control de los puntos de control (checkpoints) y los programas de transcripción asociados a la proliferación. Mediante el control del licenciamiento de la replicación y de la expresión génica de la fase S, la actividad de **TFDP1** influye en la estabilidad del genoma y en las respuestas celulares al estrés oncogénico. La desregulación de la señalización **TFDP1–E2F** se implica con frecuencia en la biología de enfermedades impulsadas por la proliferación, lo que convierte a **DP-1** en un nodo útil para estudiar el control del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y la reconfiguración de redes transcripcionales en células humanas.

DP-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TFDP1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DP-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TFDP1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TFDP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DP-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TFDP1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DP-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DP-1 en células tumorales con expresión de TFDP1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.