Doublecortin/DCX CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400033

概要

DCXは、重合した微小管に結合してそれを安定化させる微小管関連タンパク質ダブルコルチンをコードしており、神経発生の過程で神経細胞の移動、神経突起の伸長、皮質層形成を協調的に制御します。ダブルコルチンは、微小管ダイナミクスを中心体の位置決めや成長円錐の誘導と統合する細胞骨格リモデリング機構の中で機能し、発達中の神経細胞における極性化や軸索伸長に影響を与えます。DCXの病的変異や発現調節異常は、X連鎖性滑脳症や皮質下帯状異所性灰白質（サブコルチカル・バンド・ヘテロトピア）など、皮質構築の破綻を特徴とする神経発達障害と関連しています。移動中の神経芽細胞や未熟神経細胞の細胞生物学的マーカーとして、DCXは発生過程の軌跡や神経細胞の位置決めを規定する機構の研究に広く用いられています。

Doublecortin/DCX CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDCX遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DCX内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DCXのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Doublecortin/DCXタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Doublecortin/DCXシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DCX欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Doublecortin/DCXの機能に不可欠なDCXエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DCXゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Doublecortin/DCX CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDoublecortin/DCX CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DCX遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Doublecortin/DCX HDRプラスミド（h）および Doublecortin/DCX HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDCXホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDCX標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。