Dorfin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406860

概要

RNF19Aは、ユビキチン依存的なタンパク質品質管理およびプロテオスタシスに関与するRBRファミリーのE3ユビキチンリガーゼであるDorfinをコードしています。Dorfinは、誤って折りたたまれたタンパク質や凝集しやすい基質の認識とユビキチン化に関与し、小胞体ストレス応答と細胞質の分解経路を結び付けることで、細胞恒常性の維持に寄与します。ユビキチンシグナルの制御や神経系・ストレス関連タンパク質のターンオーバー調節を通じて、RNF19Aは、タンパク質凝集やプロテオスタシス破綻を特徴とする神経変性疾患などの文脈で研究されてきました。その活性は、ER関連分解（ERAD）を司る経路、オートファジー関連のクリアランス、ストレス誘導性シグナル伝達ネットワークなどと交差しています。

Dorfin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRNF19A遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RNF19A内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RNF19Aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Dorfinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Dorfinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RNF19A欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Dorfinの機能に不可欠なRNF19Aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RNF19Aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Dorfin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDorfin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RNF19A遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Dorfin HDRプラスミド（h）および Dorfin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRNF19Aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRNF19A標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。