Plasmide Double Nickase (h) Dok-1: sc-401398-NIC

Le gène humain **DOK1** code **Dok-1**, une protéine cytoplasmique d’arrimage/adaptatrice qui est phosphorylée sur des tyrosines en aval de tyrosine kinases réceptrices et non réceptrices, et qui assemble des complexes de signalisation inhibiteurs. Par ses interactions avec des partenaires contenant des domaines SH2/SH3, Dok-1 module notamment les voies Ras/MAPK et PI3K/AKT afin de limiter les signaux mitogènes et de survie, influençant ainsi l’adhérence, la migration et les réponses des cellules hématopoïétiques. Dans les lignées immunitaires et myéloïdes, Dok-1 participe au contrôle par rétroaction négative de la signalisation des cytokines et des facteurs de croissance, et peut affecter la progression du cycle cellulaire ainsi que les programmes de différenciation. Une expression ou une signalisation dérégulée de DOK1 a été associée à une activité altérée des réseaux de tyrosine kinases dans le cancer et à des perturbations des contextes de signalisation immunitaire, ce qui soutient son utilisation dans des études de voies et de mécanismes.

Dok-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DOK1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DOK1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DOK1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DOK1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.