DOCK 11 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-406204-ACT

DOCK11 (Dedicator of Cytokinesis 11) kodiert einen Guanin-Nukleotid-Austauschfaktor der Rho-Familie, der bevorzugt Cdc42 aktiviert, um den Umbau des Aktin-Zytoskeletts, die Zellpolarität und die gerichtete Migration zu koordinieren. Durch die Regulation der Signalübertragung kleiner GTPasen trägt DOCK11 zur Wanderung von Immunzellen, zur Dynamik der Zelladhäsion sowie zu Prozessen bei, die mit endozytotischen und membranumgestaltenden Ereignissen verknüpft sind. Eine veränderte DOCK11-Aktivität wurde mit Phänotypen der Immunfehlregulation in Verbindung gebracht und im Kontext der hämatologischen und lymphatischen Biologie untersucht, wo Rho-GTPase-abhängige Signalwege Proliferation und zelluläre Interaktionen beeinflussen. Als menschliches Gen ist DOCK11 von Interesse, um Cdc42-gesteuerte Signalwege zu analysieren, die Rezeptorsignale mit der Zytoskelettorganisation und transkriptionellen Programmen koppeln.

DOCK 11 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen DOCK11-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

DOCK 11 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des DOCK11-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der DOCK11-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen DOCK 11-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native DOCK11-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von DOCK 11-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des DOCK 11-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem DOCK11-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.