DOCK 11 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-406204-ACT

DOCK11（dedicator of cytokinesis 11）は、Rhoファミリーのグアニンヌクレオチド交換因子（GEF）をコードし、主にCdc42を活性化することで、アクチン細胞骨格の再編成、細胞極性、方向性移動を協調的に制御します。低分子GTPアーゼシグナルの調節を通じて、DOCK11は免疫細胞のトラフィッキング、接着ダイナミクス、ならびにエンドサイトーシスや膜リモデリングに関連する過程に寄与します。DOCK11活性の変化は免疫調節異常の表現型と関連づけられており、Rho GTPアーゼ依存性シグナルが増殖や細胞間相互作用に影響することから、血液学・リンパ系の生物学的文脈で研究されています。ヒト遺伝子としてのDOCK11は、受容体からの刺激を細胞骨格の組織化や転写プログラムへと結び付けるCdc42駆動経路を解明するうえで注目されています。

DOCK 11 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DOCK11の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

DOCK 11 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DOCK11 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDOCK11転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性DOCK 11の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDOCK11遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDOCK 11依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDOCK11発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDOCK 11経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。