Dnmt2 Lentiviral Activation Particles (h): sc-402709-LAC

TRDMT1 kodiert Dnmt2 (auch als TRDMT1 bekannt), eine evolutionär konservierte RNA-Cytosin-5-Methyltransferase, die vorwiegend tRNA an C38 methyliert und dadurch tRNA-Stabilität, Genauigkeit der Decodierung und stressresponsive Translation beeinflusst. Über RNA-Methylierung und eine umfassendere epitranskriptomische Regulation trägt Dnmt2 zur Proteostase, zur zellulären Anpassung an oxidativen und genotoxischen Stress sowie zur Aufrechterhaltung der RNA-Integrität bei. Eine veränderte TRDMT1-Aktivität wurde in Zusammenhängen dysregulierter Translation und Stresssignalgebung untersucht, einschließlich der Krebsbiologie und anderer Erkrankungen, bei denen RNA-Modifikationswege und die Kontrolle der Translation gestört sind. Diese Eigenschaften machen TRDMT1 zu einem nützlichen Ziel, um RNA-modifikationsabhängige Genexpressionsprogramme und deren nachgeschaltete zelluläre Phänotypen zu untersuchen.

Dnmt2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente TRDMT1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Dnmt2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der TRDMT1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Dnmt2-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen TRDMT1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.