Plasmide CRISPR d'Activation (h) DNase II: sc-405046-ACT

Le gène humain **DNASE2** code la DNase II, une endonucléase acide lysosomale qui dégrade l’ADN provenant de cellules apoptotiques, de noyaux phagocytés et d’autres sources extracellulaires ou vésiculaires après phagocytose. En éliminant l’ADN au sein des compartiments endolysosomaux, la DNase II contribue au maintien de l’homéostasie des acides nucléiques et limite l’activation aberrante de la détection innée des acides nucléiques ainsi que des voies de signalisation inflammatoires en aval. L’altération ou la dérégulation de l’activité de **DNASE2** a été associée à une clairance défectueuse de l’ADN, à une augmentation des programmes de gènes stimulés par l’interféron et à des phénotypes inflammatoires pertinents pour l’auto-immunité et le stress hématologique. La fonction de la DNase II est donc largement étudiée dans le contexte de l’apoptose, de l’efferocytose, de la biologie lysosomale et de la régulation immunitaire dépendante des acides nucléiques.

DNase II Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DNASE2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DNase II Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DNASE2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DNASE2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DNase II. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DNASE2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DNase II au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DNase II dans les cellules tumorales présentant une expression de DNASE2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.