DNAH9 Double Nickase Plasmid (h): sc-407035-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das DNAH9 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- DNAH9 Double-Nickase-Plasmid (h) und DNAH9 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DNAH9 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DNAH9 Double Nickase Plasmid (h) | sc-407035-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DNAH9 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-407035-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DNAH9 kodiert die axonemale Dynein-Schwerkette 9, einen großen, ATP-abhängigen Mikrotubuli-Motor, der zum äußeren Dyneinarm beiträgt und die für die Zilienbiegung erforderlichen Kräfte erzeugt. Durch regulierte Dynein–Mikrotubuli-Interaktionen unterstützt DNAH9 die Funktion motiler Zilien und Flagellen, die der mukoziliären Clearance und anderen durch Zilien angetriebenen Flüssigkeitsströmungsprozessen zugrunde liegt. Eine veränderte DNAH9-Aktivität wurde mit Phänotypen motiler Ziliopathien in Verbindung gebracht, darunter Lateralisierungsdefekte und Funktionsstörungen der Atemwege, die mit der Biologie der primären ziliären Dyskinesie vereinbar sind. Als auslesereicher Zilienmotor wird DNAH9 breit in Signalwegen untersucht, die die axonemale Assemblierung, die Zilienschlagfrequenz und die mechanochemische Energietransduktion steuern.
DNAH9 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DNAH9-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DNAH9 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DNAH9-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DNAH9-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.