DNA pol ε A CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402290-ACT

POLEは、DNAポリメラーゼεの触媒サブユニットAをコードしており、先導鎖DNA合成およびS期進行に必須の高忠実度複製ポリメラーゼです。DNAポリメラーゼεは複製フォークの安定性に関与し、CMGヘリカーゼ複合体と協調するとともに、複製エラーを抑制する内在性の3′→5′エキソヌクレアーゼ校正（プルーフリーディング）機能にも寄与します。DNA複製とゲノム維持における役割を通じて、POLEは染色体の完全性を保護するDNA損傷応答シグナルや複製ストレス経路とも接点を持ちます。POLEの機能または制御の変化は、変異負荷の増大やゲノム不安定性の表現型と関連し、がんに関連する複製異常やDNA修復依存性を扱う研究でしばしば検討対象となります。

DNA pol ε A CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性POLEの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

DNA pol ε A CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における POLE 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPOLE転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性DNA pol ε Aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPOLE遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDNA pol ε A依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPOLE発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDNA pol ε A経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。