DNA pol β CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422336

概要

Polb は DNA ポリメラーゼβをコードしており、これは塩基除去修復（BER）経路の中核酵素として、損傷塩基の除去後に生じる短い DNA ギャップを埋め、5′-デオキシリボースリン酸（5′-dRP）中間体を処理します。DNA ポリメラーゼβは XRCC1、DNA リガーゼIII、その他の BER 因子と協調することでゲノムの安定性を維持し、酸化損傷やアルキル化によって生じる病変の蓄積を抑えます。ポリメラーゼβを含む BER 構成要素の破綻または制御異常は、変異負荷の増大、DNA 損傷シグナル伝達の障害、細胞ストレス応答の変化と関連しています。これらの機能により、Polb は DNA 修復能、遺伝毒性に対する感受性、ならびに修復不全が疾患関連のゲノム不安定性へと結び付く機構を研究するうえで重要な標的となります。

DNA pol β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPolb遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Polb内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Polbのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DNA pol βタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DNA pol βシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Polb欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DNA pol βの機能に不可欠なPolbエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Polbゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DNA pol β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびDNA pol β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Polb遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DNA pol β HDRプラスミド（m）および DNA pol β HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPolbホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPolb標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。