Plasmide Double Nickase (h) DNA Ligase I: sc-402830-NIC

Le gène humain **LIG1** code la ligase I de l’ADN, une ligase dépendante de l’ATP qui colmate les cassures simple brin en reliant les fragments d’Okazaki lors de la synthèse du brin retardé et en achevant la ligation des encoches d’ADN associées à la réparation. La ligase I de l’ADN agit à l’interface entre la réplication et plusieurs voies de réparation de l’ADN, notamment la réparation par excision de base à long segment (long-patch BER) et la résolution des discontinuités des brins d’ADN qui surviennent lors du traitement des dommages à l’ADN. Une activité correcte de LIG1 soutient la stabilité du génome, la progression de la fourche de réplication et la fidélité du cycle cellulaire, et sa perturbation est associée à une augmentation du stress réplicatif et de la mutagenèse. Une capacité de ligation altérée a été impliquée dans des phénotypes d’instabilité génomique pertinents pour la biologie du cancer et pour des syndromes héréditaires de déficience de réparation de l’ADN, faisant de LIG1 un nœud utile pour étudier les mécanismes de maintenance de l’ADN.

DNA Ligase I Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LIG1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LIG1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LIG1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LIG1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.