Plásmido CRISPR de Activación (h) DMXL2: sc-417505-ACT

DMXL2 (Dmx-like 2) codifica una gran proteína de andamiaje con repeticiones WD, implicada en el tráfico vesicular y la exocitosis regulada, y que respalda la dinámica de membranas en compartimentos secretores y sinápticos. Al coordinar interacciones proteína–proteína dentro de las vías endomembranosas, DMXL2 se vincula con la función de neuronas y células endocrinas, incluidos procesos que acoplan la maduración, el anclaje (docking) y la liberación de vesículas. Las alteraciones en la expresión o la función de DMXL2 se han asociado con fenotipos del neurodesarrollo y con desregulación reproductiva/endocrina, lo que la hace relevante para estudiar el control de la vía secretora en células humanas. Como regulador de amplio espectro del tráfico de membranas, DMXL2 se examina con frecuencia en modelos de biología sináptica, secreción hormonal y homeostasis celular.

DMXL2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DMXL2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DMXL2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DMXL2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DMXL2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DMXL2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DMXL2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DMXL2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DMXL2 en células tumorales con expresión de DMXL2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.